產(chǎn)品名稱： Stemcell 07851 Lymphoprep 淋巴細(xì)胞分離液

產(chǎn)品貨號(hào):? ?07851

淋巴細(xì)胞分離液Lymphoprep即用型

Lymphoprep是一種無(wú)菌、內(nèi)毒素含量低的即用型分離液，是目前國(guó)內(nèi)外分離正常人或病人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC:Mononuclear cells of Peripheral blood)(包括單核細(xì)胞monocytes和淋巴細(xì)胞lymphocytes)的常用方法，具有與昂貴的GE公司的PLUS或PREMIUM分離液同樣的指標(biāo)。

工作原理

PBMC與血液中的其他成分存在密度差異，利用密度在1.077±0.001g/ml之間而且近于等滲的LymphoprepTM溶液作密度梯度離心時(shí)，紅細(xì)胞和粒細(xì)胞由于密度大，故沉于分離液底部。PBMC密度稍低于分離液，故位于分離液界面上，獲得PBMC。LymphoprepTM分離液含有多糖（polysacccharide）,多糖能粘附在細(xì)胞表面，使紅細(xì)胞和粒細(xì)胞聚集下沉，但它對(duì)淋巴細(xì)胞的活性和紅細(xì)胞和粒細(xì)胞進(jìn)一步分離有負(fù)面影響。

注意事項(xiàng)：

該分離液僅適用于人體的外周血液，不適用于動(dòng)物。

使用該分離液時(shí)，需將待分離的血液用生理鹽水做等體積的稀釋。

分離液的保存應(yīng)置于無(wú)菌環(huán)境，并避光保存。

詳細(xì)操作步驟見產(chǎn)品說(shuō)明書。

技術(shù)參數(shù)

成分：泛影葡胺鈉(Sodium diatrizoate)：9.1% (w/v)；多糖：5.7% (w/v)

密度：1.077±0.001g/ml

滲透性：290±15mOsm

內(nèi)毒素含量：<1.0EU/ml

分離所得PBMC中紅細(xì)胞的含量：整個(gè)細(xì)胞數(shù)目的3-10%。

操作步驟（僅供參考）

第一步、

在含有抗凝劑（EDTA、heparin、或ACD）的管子內(nèi)收集血液，或者用去纖維蛋白的血液。此處抗凝劑的選擇取決于得到淋巴細(xì)胞以后，后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求，一般選取EDTA即可。

第二步、

用等體積的0.9%的NaCl溶液（即生理鹽水）稀釋血液。

第三步、

在12-15ml的離心管內(nèi)，將6ml稀釋后的血液鋪在3ml分離介質(zhì)Lymphoprep上。

此處鋪層可以采用從上面鋪，或從下面鋪兩種方法。鋪層的關(guān)鍵是不能讓血液和分離液混在一起，要界面分層清晰。

第四步、

在室溫下——20攝氏度左右，用水平轉(zhuǎn)子，800g的離心力，離心20分鐘。（如果血液存放時(shí)間超過(guò)2小時(shí)——從人體抽出算起，離心時(shí)間延長(zhǎng)為30分鐘）。

第五步、

離心前和離心后，離心管內(nèi)液體分層如下圖所示。

離心后，離心管內(nèi)位于血液和分離液界面處的明顯的一層即為淋巴細(xì)胞層。

用移液管直接吸取淋巴細(xì)胞層，注意，不要去除上面的血液層，而是直接吸取。移至另一離心管中。

第六步、

用大約2倍體積的0.9%的NaCl溶液（生理鹽水）稀釋收集到的淋巴細(xì)胞，在250g-300g的離心力下，離心10分鐘，（此處在加上稀釋液后的體積在15ml離心管內(nèi)不宜超過(guò)5-6ml，體積過(guò)大，會(huì)降低淋巴細(xì)胞的產(chǎn)率），收集沉淀，即得到所需的人外周血單個(gè)核細(xì)胞，即可用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品名稱： Stemcell 07851 Lymphoprep 淋巴細(xì)胞分離液

產(chǎn)品貨號(hào):? ?07851

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