產(chǎn)品詳細(xì)介紹：

種屬: 小鼠（Mus musculus）

品系： 未知

組織來源: 胰腺（Pancreas）

疾病: 癌癥（ Carcinoma）

年齡: 成年（Adult）

性別: 未知（Unknown）

細(xì)胞形態(tài)： 表皮細(xì)胞（Epithelial）

生長特性: 貼壁生長（Adherent）

培養(yǎng)瓶中細(xì)胞操作步驟

對于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，寄送前，我們會將培養(yǎng)基充滿整個培 養(yǎng)瓶，以減少產(chǎn)品運輸過程中貼壁細(xì)胞的脫落。

1. 收到細(xì)胞產(chǎn)品后，請注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置 顯微鏡下仔細(xì)檢查是否渾濁、是否細(xì)菌污染。因在運輸過程 中存在顛簸，且有些細(xì)胞對溫度變化也很敏感，可能存在一些細(xì)胞脫落漂浮的情況，這些細(xì)胞仍是活細(xì)胞，請勿丟棄，可離心富集后傳代使用。

2. 對于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，在生物安全柜環(huán)境中，用真空泵去除培養(yǎng)瓶中的多余培養(yǎng)基，至剩余5-8mL左右，隨后將細(xì)胞置于含有5% CO 2的37℃恒溫 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如果細(xì)胞已經(jīng)長滿培養(yǎng)瓶，請立即傳代。

3. 對于懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，在生物安全柜環(huán)境中，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞至離心管中，離心200×g / 5 – 10 min，去除上清后，用5 mL 培養(yǎng)基吹散細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，隨后置于含有5% CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

凍存細(xì)胞操作步驟

注意：為保存細(xì)胞的高存活率，請收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。

1.將凍存管置于37℃ 水浴中來回晃動，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約2分鐘。

2.一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用 70%酒精噴拭凍存管表面。從此步開始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。

3.將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中， 離心200×g / 5 – 10 min，用真空泵去除含有凍存液的上清。

4.用完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細(xì)胞復(fù)蘇的存活率，請將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用。

5.將細(xì)胞置于含有5%CO2?的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)

1.吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基。

2.加入 0mL?0.25（w/v）Trypsin-0.53mM?EDTA溶液，并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細(xì)胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3至5分鐘（此處為12.5?cm2培養(yǎng)瓶所用體積，可根據(jù)實際情況增減用量）。

3.加入2mL完全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞從培養(yǎng)瓶表面吹落，并使細(xì)胞分散。

4.離心200xg/5min，去除上清后，取適量的培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸, 取適量懸液置于新的培養(yǎng)瓶中，并加入新鮮細(xì)胞完全培養(yǎng)基至總體積為4mL。

5.將細(xì)胞置于含有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

6.傳代比例：建議 1:2 至 1:3。

7.培養(yǎng)基換液: 每隔 2至 3天。

266-6細(xì)胞ATCC CRL-2151小鼠胰腺腺泡癌細(xì)胞培養(yǎng)注意事項

1.收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。

2.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細(xì)胞因子 等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問 題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3.用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細(xì)胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細(xì)胞均 會貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍(lán) 染色測定細(xì)胞活力，如果證實細(xì)胞活力正常， 請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。

4.靜置細(xì)胞貼壁后，請將細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng)，待細(xì)胞匯合度80%左右時正常傳代。

5.請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

6.建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7.該細(xì)胞僅供科研使用。

參考文獻(xiàn)

References
Kruse?F,?et?al.?The?cell-specific?elastase?I?enhancer?comprises?two?domains?[published?erratum?appears?in?Mol.?Cell.?Biol.?8:?1862,?1988].?Mol.?Cell.?Biol.?8:?893-902,?1988.?PubMed:?3352608

Swift?GH,?et?al.?Differential?requirements?for?cell-specific?elastase?I?enhancer?domains?in?transfected?cells?and?transgenic?mice.?Genes?Dev.?3:?687-696,?1989.?PubMed:?2744460

Ornitz?DM,?et?al.?Elastase?I?promoter?directs?expression?of?human?growth?hormone?and?SV40?T?antigen?genes?to?pancreatic?acinar?cells?in?transgenic?mice.?Cold?Spring?Harbor?Symp.?Quant.?Biol.?50:?399-409,?1985.?PubMed:?3006998

Rose?SD,?et?al.?A?single?element?of?the?elastase?I?enhancer?is?sufficient?to?direct?transcription?selectively?to?the?pancreas?and?gut.?Mol.?Cell.?Biol.?14:?2048-2057,?1994.?PubMed:?8114736

Swift?GH,?et?al.?An?element?of?the?elastase?I?enhancer?is?an?overlapping?bipartite?binding?site?activated?by?a?heteromeric?factor.?J.?Biol.?Chem.?269:?12809-12815,?1994.?PubMed:?8175694