PAXgene Blood RNA Kit
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PAXgene Blood RNA Kit
用于從PAXgene Blood RNA Tubes中穩(wěn)定的血液中分離和純化細(xì)胞內(nèi)RNA
? ? ? PAXgene Blood RNA系統(tǒng)由用于血液收集,穩(wěn)定和轉(zhuǎn)運(yùn)的PAXgene Blood RNA Tubes(可從BD獲得,目錄號(hào)762165)和用于基于硅膠膜的RNA分離和純化的PAXgene Blood RNA Kit組成。 可以使用微量離心機(jī)手動(dòng)進(jìn)行純化,或在QIAcube上自動(dòng)進(jìn)行純化。該系統(tǒng)已獲得FDA營(yíng)銷許可,并提供體外診斷用途的精確性能規(guī)格。
? ? ? PAXgene Blood RNA Tubes用于收集全血并在18-25°C下穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)RNA長(zhǎng)達(dá)3天(或在2-8°C下最多5天)。目前可獲得的數(shù)據(jù)顯示細(xì)胞RNA在-20°C或-70°C下穩(wěn)定至少60個(gè)月。
? ? ? 使用PAXgene Blood RNA System純化的總RNA是高純度的,A?260?/?A?280值在1.8和2.2之間且≤1.0%(w / w)基因組DNA。當(dāng)使用多達(dá)30%的洗脫液時(shí),至少95%的樣品在RT-PCR中沒有顯示出抑制作用。
? ? ? 用PAXgene Blood RNA System和自動(dòng)化方案純化的RNA是高純度的,如缺乏RT-PCR抑制(見上文)和A?260?/?A?280值在1.8和2.2之間所示。通過β-肌動(dòng)蛋白基因序列的定量實(shí)時(shí)PCR測(cè)量,基因組DNA以≤1%(w / w)存在于≥95%的所有樣品中。
? ? ?使用PAXgene Blood RNA系統(tǒng)進(jìn)行RNA純化的自動(dòng)化方案提供了高度可重復(fù)和可重復(fù)的RT-PCR結(jié)果,使其對(duì)臨床診斷測(cè)試具有高度可靠性。
? ? ? PAXgene Blood RNA Kit用于從PAXgene Blood RNA Tube中收集的2.5 ml人全血中純化總RNA。該過程很簡(jiǎn)單,可以使用手動(dòng)或自動(dòng)程序進(jìn)行。
? ? ? PAXgene Blood RNA Tubes含有基于專利RNA穩(wěn)定技術(shù)的專利試劑組合物(美國(guó)專利6,602,718和6,617,170)。該試劑組合物保護(hù)RNA分子免受RNase的降解,并使基因表達(dá)的離體變化最小化。PAXgene Blood RNA Tubes用于收集全血并在18-25°C下穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)RNA長(zhǎng)達(dá)3天或在2-8°C下最多5天。目前可獲得的數(shù)據(jù)顯示細(xì)胞RNA在-20℃或-70℃下穩(wěn)定至少60個(gè)月。
? ? ? PAXgene Blood RNA程序很簡(jiǎn)單,可以使用手動(dòng)或自動(dòng)程序進(jìn)行
? ? ? 純化開始于離心步驟以在PAXgene Blood RNA Tube中沉淀核酸。將沉淀洗滌并重懸浮,并在優(yōu)化的緩沖液中與蛋白酶K一起孵育以產(chǎn)生蛋白質(zhì)消化。通過PAXgene Shredder旋轉(zhuǎn)柱進(jìn)行另外的離心以使細(xì)胞裂解物均質(zhì)化并除去殘留的細(xì)胞碎片,并將流出級(jí)分的上清液轉(zhuǎn)移到新的微量離心管中。加入乙醇以調(diào)節(jié)結(jié)合條件,并將裂解物應(yīng)用于PAXgene RNA旋轉(zhuǎn)柱。在短暫離心期間,當(dāng)污染物通過時(shí),RNA選擇性地結(jié)合到PAXgene二氧化硅膜上。在幾個(gè)有效的洗滌步驟中除去剩余的污染物。在第一和第二洗滌步驟之間,用DNase I處理膜以除去痕量的結(jié)合DNA。洗滌步驟后,將RNA在洗脫緩沖液中洗脫并加熱變性。?
? ? ? 在QIAcube上自動(dòng)化的樣品制備遵循與手動(dòng)程序相同的步驟,使您能夠繼續(xù)使用PAXgene Blood RNA Kit純化高質(zhì)量RNA。
? ? ? 自動(dòng)RNA純化方案由2部分(或方案),“PAXgene Blood RNA Part A”和“PAXgene Blood RNA Part B”組成,兩部分之間有簡(jiǎn)短的人工干預(yù)。
? ? ? 將離心,洗滌和重懸的核酸沉淀從PAXgene Blood RNA Tube轉(zhuǎn)移到處理管中,將其置于QIAcube工作臺(tái)上的熱振蕩器單元中。操作員從菜單中選擇并啟動(dòng)“PAXgene Blood RNA Part A”協(xié)議。QIAcube執(zhí)行協(xié)議的步驟,直至在洗脫緩沖液中洗脫RNA。操作人員將含有純化RNA的微量離心管轉(zhuǎn)移到QIAcube的熱水瓶單元中。操作員從菜單中選擇并啟動(dòng)“PAXgene Blood RNA Part B”協(xié)議,并通過QIAcube進(jìn)行熱變性。
? ? ? 平均樣品制備時(shí)間(基于來自12個(gè)樣品制備的數(shù)據(jù))為125分鐘,僅有約20分鐘的實(shí)際操作時(shí)間。
? ? ? 當(dāng)該試劑盒與PAXgene Blood RNA Tubes一起使用時(shí),該系統(tǒng)提供來自全血的細(xì)胞內(nèi)RNA用于分子診斷測(cè)試中使用的RT-PCR。
PAXgene Blood RNA Kit產(chǎn)品詳細(xì)信息
50個(gè)PAXgene旋轉(zhuǎn)柱,50個(gè)PAXgene粉碎機(jī)旋轉(zhuǎn)柱,加工管,無RNase DNase I,無RNase試劑和緩沖液。與PAXgene Blood RNA Tubes配合使用
? 品牌? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?貨號(hào)? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?名稱? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
Qiagen? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?762174? ? ? ?? ? ? ? ? ? ? ? PAXgene Blood RNA Kit (50)? ? ?
?BD? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?762165? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??PAXgene Blood RNA Tube?
客戶常見問題
1、PAXgene Blood RNA Tubes可以進(jìn)行冷凍/解凍循環(huán)嗎?
答:如果根據(jù)使用說明使用,則靜脈切開術(shù)期間不可能回流,因此試劑不可能進(jìn)入患者的手臂。
3、來自PAXgene組織固定,石蠟包埋(PFPE)組織的RNA的完整性是什么?
4、PAXgene Blood RNA試劑盒預(yù)計(jì)R??NA產(chǎn)量是多少?
答:從2.5ml人全血中分離的RNA的典型產(chǎn)率為4至20μg。然而,產(chǎn)率高度依賴于供體,并且在一些情況下可以實(shí)現(xiàn)更高或更低的產(chǎn)率。在WBC計(jì)數(shù)為4.8至11.0×10 6個(gè)細(xì)胞/ ml血液的所有樣品中,至少95%將產(chǎn)生每管≥3μg的總RNA。為了防止由于管底部填充導(dǎo)致的低產(chǎn)量,請(qǐng)參閱靜脈采血常見問題和血液采集演示視頻。
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