產(chǎn)品英文名稱：Alkaline Phosphatase Labeling Kit-NH2
產(chǎn)品中文名稱：堿性磷酸酶標記試劑盒-NH2

Alkaline Phosphatase Labeling Kit-NH2 產(chǎn)品特性
整個標記過程僅需3個小時                         
整個標記過程在1支過濾管中進行
 酶標抗體回收率高
  
Alkaline Phosphatase Labeling Kit-NH2 產(chǎn)品描述
該試劑盒主要用于制備酶免疫分析 (EIA) 所需的堿性磷酸酶標IgG以及競爭性EIA所需的堿性磷酸酶標抗原。該試劑盒中的NH2-reactive ALP能夠與含有NH2的蛋白質(zhì)或者其他分子反應。該試劑盒包含了標記過程中所需的全部試劑，包括儲存用緩沖液。NH2-reactive ALP不需任何活化就可以和靶分子結(jié)合。因此，當堿性磷酸酶標IgG用于EIA時，NH2-reactive ALP的高效性足以使它在標記后省去純化的過程。即使在標記后需要有一個高純度的精制過程，也只要用親和柱或凝膠滲透柱就能簡單達到目的。在標記小分子的時候，使用試劑盒中包含的過濾管即可除去分子量較大的分子。
*ALP：Alkaline Phosphatase (堿性磷酸酶)
備注：經(jīng)過同仁化學研究所的長期穩(wěn)定性考驗，代碼為LK12的產(chǎn)品在0-5℃未開封的條件下由原來可以保存半年延長至一年。

Alkaline Phosphatase Labeling Kit-NH2 試劑盒內(nèi)容
NH2-reactive ALP...................100 µg × 3管      
Reaction buffer.....................200 µl × 1管      
Filtration tube........................3支
Washing buffer...........4 ml × 1瓶
Storage buffer.............4 ml × 1瓶

標記IgG操作步驟
（1）將100 μl Washing buffer以及含有50-200 μg IgG的樣品溶液加入到過濾管中。a）
（2）8,000-10,000 g離心10分鐘后，加入100 μl Washing buffer再離心一次。b）
（3）將10 μl Reaction buffer加入到NH2-reactive ALP中并用移液器吹打使其溶解。
（4）將含有NH2-reactive ALP的溶液轉(zhuǎn)移到IgG所集中的過濾管的濾膜上。
（5）用移液器吸取溶液吹洗凈整個濾膜表面，然后將過濾管放入培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)2小時。
（6）加入190 μl Storage buffer 并吹打10到15次來回收標記產(chǎn)物。c）將溶液轉(zhuǎn)移至0.5ml的試管中，并儲    存于0-5℃下。d）
  a）推薦的IgG的量為100 μg，樣品溶液的體積不應超過100 μl。如果抗體濃度低于0.5 mg/ml，重復步驟1和2直至總的IgG聚積量達到50-200 μg。
  b）如果溶液在離心后仍然殘留在膜上，可以再離心5分鐘或者適當增加轉(zhuǎn)速。
  c）標記后共軛物的濃度為0.5-1.3 mg/ml。在進行后續(xù)的酶免疫，免疫印跡，免疫轉(zhuǎn)染試驗前先要將標記后的IgG稀釋至適當?shù)臐舛?。每個IgG分子上會被標記上1到3個堿性磷酸酶分子。沒有被結(jié)合的堿性磷酸酶不會干擾正常的免疫試驗。如果一定要純化的話，可以使用凝膠滲透柱或親合柱。
  d）通常，堿性磷酸酶標記后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能夠保存2個月，如果需要保存更久，可以在-20℃下存放。但還要注意樣品自身是否穩(wěn)定。
標記小分子操作步驟：
（1）用Reaction buffer制備50 μl，1 mM的氨基化合物，a）并將該溶液加入到NH2-reactive ALP管中。吹打數(shù)次使其充分混合，然后置于37℃下培養(yǎng)1小時。
（2）將100 μl Washing buffer加入到反應液中并將整個溶液全部移入過濾管中。
（4）加入200 μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次來回收標記產(chǎn)物。c）將溶液轉(zhuǎn)移至0.5 ml的試管中，并儲存于0-5℃下。d）
  a）如果氨基化合物在水溶液中無法溶解，可以用DMSO使其溶解，制備成10 mM的溶液，取5 μl與45 μl Reaction buffer混合。
  b）如果溶液在離心后仍然殘留在膜上，可以再離心5分鐘或者適當增加轉(zhuǎn)速。
  c）標記產(chǎn)物的濃度大約為400-500 μg/ml（10-12.5 μM）。1-2個靶分子能夠和1個堿性磷酸酶分子結(jié)合。
  d）標記后的小分子在0-5℃下能夠存放至少6個月。

Alkaline Phosphatase Labeling Kit-NH2 注意事項
所需標記的較大的蛋白質(zhì)的分子量要>50,000。
所需標記的較小的氨基化合物的分子量要<5,000。
標記過程中，標記前后的IgG總是在過濾管的濾膜上。
如果IgG溶液含有其它分子量超過10,000的蛋白質(zhì)，如BSA或凝膠，在使用該試劑盒標記前請先純
化IgG溶液。IgG溶液能夠使用IgG純化試劑盒來純化 (不包含于此試劑盒中)。
如果IgG溶液中含有小的不溶物，離心后提取上清液來標記。
如果長時間不使用，建議您把試劑盒中的酶NH2-reactive ALP放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮氣，可以更好地保持酶的活性，但請不要把其它試劑和過濾管放到-20℃冰箱中，仍請放在0-5℃冰箱中保存。