產品英文名稱：HiLyte  FluorTM 647 Labeling Kit - NH2
產品中文名稱：HiLyte  FluorTM 647 熒光素標記試劑盒- NH2

HiLyte  FluorTM 647 Labeling Kit - NH2 產品特性
整個標記過程僅需1個小時                         
整個標記過程在1支過濾管中進行              
熒光標記抗體回收率高                                                
適用于50-200 μg的IgG
     
HiLyte  FluorTM 647Labeling Kit - NH2 產品描述
NH2-reactive HiLyte FluorTM * 647是試劑盒的成分之一，它有一個琥珀酰亞胺基（NHS），能與蛋白質或者其它分子的氨基反應。該試劑盒中包含了標記所需的全部試劑。每一管NH2-reactive HiLyte FluorTM 647最多能夠標記200 μg的IgG，每個IgG分子可與4-6個HiLyte FluorTM 647分子共價結合。標記過程十分簡單，只需要在特制的過濾膜上將NH2-reactive HiLyte FluorTM 647加入到IgG溶液中，然后在37℃下培養(yǎng)10分鐘。過量的HiLyte FluorTM 647能夠用過濾管除去。被HiLyte FluorTM 647標記后的IgG的激發(fā)和發(fā)射波長分別為652 nm和673 nm。
* HiLyte FluorTM為AnaSpec,Inc公司的商標

HiLyte  FluorTM 647Labeling Kit - NH2 試劑盒內容
- NH2-Reactive HiLyte FluorTM 555 .... 3 tubes
- Reaction Buffer ............................ 500  x 1
- WS Buffer .................. 4 ml x 1
- Filtration Tube ............. 3 tubes

標記IgG操作步驟
（1）將100 μl WS buffer以及含有100 μg IgG的樣品溶液加入到過濾管中。a）
（2）8,000-10,000 g離心10分鐘。 b）
（3）將10 μl DMSO加入到NH2-reactive HiLyte FluorTM 647中并用移液器吹打使其溶解。c）
（4）將100 μl Reaction buffer以及8 μl NH2-reactive HiLyte FluorTM 647溶液加入到過濾管中，吹打使其混合。（5）將過濾管放入培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)10分鐘。
（6）將100 μl WS buffer加入到過濾管中，8,000-10,000 g離心10分鐘，b）除去濾液。
（7）將200 μl WS buffer加入到過濾管中，8,000 g離心10分鐘，b）重復該步驟一次。
（8）將200 μl WS buffer加入到過濾管中吹打10-15次來回收標記產物。e）將該溶液轉移到0.5 ml試管中，在0-5℃下保存。
  a）樣品溶液的體積不應超過100 μl。如果抗體濃度低于1 mg/ml，重復步驟1和2直至總的IgG聚積量達到100 μg。如果聚積過程中濾液的體積超過400 μl，則在進行后續(xù)的離心操作前應除去濾液。
 b）如果溶液在離心后仍然殘留在膜上，可以再離心5分鐘或者適當增加轉速。
 c）NH2-reactive HiLyte FluorTM 647在管子的底部，向管底加入10 μl DMSO，吹打數次使其溶解。
d）如果IgG的量為200 μg，加入所有的NH2-reactive HiLyte FluorTM 647溶液。
e）并不一定要使用WS buffer來回收標記產物，可以選擇任何適合于該實驗的緩沖液來替代。HiLyte FluorTM 647/IgG比率的測定
測定HiLyte FluorTM 647標記抗體溶液在280 nm以及652 nm處的吸光度，用以下公式計算比率：
比率（每個IgG分子結合的HiLyte FluorTM 647分子數）=0.85×A652/（A280-0.08×A652）
A652：652 nm處的吸光度       A280：280 nm處的吸光度

HiLyte  FluorTM 647 Labeling Kit - NH2 注意事項
用該試劑盒標記的蛋白質的分子量要>50,000。
 在標記過程中，IgG或者HiLyte FluorTM 647-IgG標記物始終在Filtration tube的濾膜上。
 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白質，如BSA或明膠時，在使用該試劑盒標記前，先要純化IgG溶液。IgG溶液能夠用IgG Purification Kits（不包含于本試劑盒中）來純化。
 如果IgG溶液含有小的不溶物，離心后取上清液來進行標記。