產(chǎn)品英文名稱：HiLyte  FluorTM 555 Labeling Kit - NH2
產(chǎn)品中文名稱：HiLyte  FluorTM 555 熒光素標(biāo)記試劑盒- NH2

HiLyte  FluorTM 555 Labeling Kit - NH2 產(chǎn)品特性
整個(gè)標(biāo)記過程僅需1個(gè)小時(shí)                         
整個(gè)標(biāo)記過程在1支過濾管中進(jìn)行              
熒光標(biāo)記抗體回收率高                                                
適用于50-200 μg的IgG

HiLyte  FluorTM 555 Labeling Kit - NH2 產(chǎn)品描述
該試劑盒主要用于制備紅色熒光標(biāo)記的蛋白質(zhì)，如免疫轉(zhuǎn)染中的IgG和示蹤用胞內(nèi)蛋白。
用NH2-reactive HiLyte FluorTM * 555是試劑盒的成分之一，它有一個(gè)琥珀酰亞胺基（NHS），能與蛋白質(zhì)或者其它分子的氨基反應(yīng)。該試劑盒中包含了標(biāo)記所需的全部試劑。每一管NH2-reactive HiLyte FluorTM 555最多能夠標(biāo)記200 μg的IgG，每個(gè)IgG分子與4-6個(gè)HiLyte FluorTM 555分子共價(jià)結(jié)合。標(biāo)記過程十分簡單，只需要在特制的過濾膜上將NH2-reactive HiLyte FluorTM 555加入到IgG溶液中，然后在37℃下培養(yǎng)10分鐘。過量的HiLyte FluorTM 555能夠用過濾管除去。被HiLyte FluorTM 555標(biāo)記后的IgG的激發(fā)和發(fā)射波長分別為555 nm和570 nm。
* HiLyte FluorTM 為AnaSpec,Inc公司的商標(biāo)

HiLyte  FluorTM 555 Labeling Kit - NH2 試劑盒內(nèi)容
NH2-reactive HiLyte FluorTM 555…….. 3管                      
Reaction buffer………………………… 0.5 ml × 1管           
WS buffer……. ….….4 ml × 1瓶
Filtration tube……… 3管

標(biāo)記IgG操作步驟
（1）將100 μl WS buffer以及含有100 μg IgG的樣品溶液加入到過濾管中。a）
（2）8,000-10,000 g離心10分鐘。 b）
（3）將10 μl DMSO加入到NH2-reactive HiLyte FluorTM 555中并用移液器吹打使其溶解。c）
（4）將100 μl Reaction buffer以及8 μl NH2-reactive HiLyte FluorTM 555溶液加入到過濾管中，吹打使其混合。d）
（5）將過濾管放入培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)10分鐘。
（6）將100 μl WS buffer加入到過濾管中，8,000-10,000 g離心10分鐘，b）除去濾液。
（7）將200 μl WS buffer加入到過濾管中，8,000g離心10分鐘，b）重復(fù)該步驟一次。
（8）將200 μl WS buffer加入到過濾管中吹打10-15次來回收標(biāo)記產(chǎn)物。e）將該溶液轉(zhuǎn)移到0.5 ml試管中，在0-5℃下保存。
a）樣品溶液的體積不應(yīng)超過100 μl。如果抗體濃度低于1 mg/ml，重復(fù)步驟1和2直至總的IgG聚積量達(dá)到100 μg。如果聚積過程中濾液的體積超過400 μl，則在進(jìn)行后續(xù)的離心操作前應(yīng)除去濾液。
b）如果溶液在離心后仍然殘留在膜上，可以再離心5分鐘或者適當(dāng)增加轉(zhuǎn)速。
c）NH2-reactive HiLyte FluorTM 555在管子的底部，向管底加入10 μl DMSO，吹打數(shù)次使其溶解。
d）如果IgG的量為200 μg，加入所有的NH2-reactive HiLyte FluorTM 555溶液。
e）并不一定要使用WS buffer來回收標(biāo)記產(chǎn)物，可以選擇任何適合于該實(shí)驗(yàn)的緩沖液來替代。HiLyte FluorTM 555/IgG比率的測定：
測定HiLyte FluorTM 555標(biāo)記抗體溶液在280 nm以及555 nm處的吸光度，用以下公式計(jì)算比率：
比率（每個(gè)IgG分子結(jié)合的HiLyte FluorTM 555分子數(shù)）=1.4×A555/（A280-0.1×A555）
A555：555 nm處的吸光度       A280：280 nm處的吸光度

HiLyte  FluorTM 555 Labeling Kit - NH2 注意事項(xiàng)
用該試劑盒標(biāo)記的蛋白質(zhì)的分子量要>50,000。
 在標(biāo)記過程中，IgG或者HiLyte FluorTM 555-IgG標(biāo)記物始終在Filtration tube的濾膜上。
 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白質(zhì)，如BSA或明膠時(shí)，在使用該試劑盒標(biāo)記前，先要純化IgG溶液。IgG溶液能夠用IgG Purification Kits（不包含于本試劑盒中）來純化。
 如果IgG溶液含有小的不溶物，離心后取上清液來進(jìn)行標(biāo)記。
 如果長時(shí)間不使用，建議您把試劑盒中的標(biāo)記試劑NH2-reactive HiLyte FluorTM 555放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮?dú)?，可以更好地保持?biāo)記試劑的活性，但請不要把其它試劑和過濾管放到-20℃冰箱中，仍請放在0-5℃冰箱中保存。