產(chǎn)品英文名稱：Fluorescein Labeling Kit-NH2
產(chǎn)品中文名稱：熒光素標記試劑盒- NH2

Fluorescein Labeling Kit-NH2 產(chǎn)品特性
整個標記過程僅需1個小時                         
整個標記過程在1支過濾管中進行              
熒光標記抗體回收率高                                                
適用于50-200 μg的IgG

Fluorescein Labeling Kit-NH2 產(chǎn)品描述
該試劑盒主要用于制備用熒光素標記的蛋白質(zhì)，如免疫轉(zhuǎn)染中的IgG和胞內(nèi)蛋白示蹤。氨基反應(yīng)型熒光素是試劑盒的成分之一，它含有琥珀酰亞胺基（NHS），能與蛋白質(zhì)或者其它分子的氨基反應(yīng)。該試劑盒中包含了標記所需的全部試劑，包括Storage buffer。每一管熒光素最多能夠標記200 μg的IgG，每個IgG分子可與4-6個熒光素分子共價結(jié)合。該試劑盒還包含一個緩沖液交換系統(tǒng)，因此含有氨基緩沖液的樣品也能用此試劑盒來標記。雖然用膜來過濾有時會導(dǎo)致IgG聚集，但是試劑盒中的緩沖液交換系統(tǒng)能夠防止標記過程中聚集現(xiàn)象的發(fā)生。用該試劑盒標記的抗體在4℃下能夠保存至少2個月。被熒光素標記后的IgG的激發(fā)和發(fā)射波長分別為495 nm和520 nm。

Fluorescein Labeling Kit-NH2 試劑盒內(nèi)容
NH2-reactive fluorescein……3管                    
Filtration tube……3管標記
WS buffer…………4 ml × 1瓶
 Reaction buffer……………… 0.5 ml × 1管

標記IgG操作步驟：
（1）將100 μl WS buffer以及含有100 μg IgG的樣品溶液加入到過濾管中。a）
（2）8,000-10,000 g離心10分鐘。 b）
（3）將10 μl DMSO加入到NH2-reactive Fluorescein中并用移液器吹打使其溶解。c）
（4）將100 μl Reaction buffer以及8 μl NH2-reactive Fluorescein溶液加入到過濾管中，
        吹打使其混合。d）
（5）將過濾管放入培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)10分鐘。
（6）將100 μl WS buffer加入到過濾管中8,000-10,000 g離心10分鐘，b）除去濾液。
（7）將200 μl WS buffer加入到過濾管中8,000-10,000 g離心10分鐘，b）重復(fù)該步驟一次。
（8）將200 μl WS buffer加入到過濾管中吹打10-15次來回收標記產(chǎn)物。e）將該溶液轉(zhuǎn)移到0.5 ml試管中，   在0-5℃下保存。
  a）樣品溶液的體積不應(yīng)超過100 μl。如果抗體濃度低于1 mg/ml，重復(fù)步驟1和2直至總的IgG聚積量達到100 μg。如果聚積過程中濾液的體積超過400 μl，則在進行后續(xù)的離心操作前應(yīng)除去濾液。
  b）如果溶液在離心后仍然殘留在膜上，可以再離心5分鐘或者適當增加轉(zhuǎn)速。
  c）NH2-reactive Fluorescein在管子的底部，向管底加入10 μl DMSO，吹打數(shù)次使其溶解，如果沒有DMSO的話，可以用乙醇來替代。
  d）如果IgG的量為200 μg，在步驟4時加入所有的NH2-reactive Fluorescein溶液。
  e）并不一定要使用WS buffer來回收標記產(chǎn)物，可以選擇任何適合于該實驗的緩沖液來替代。
Fluorescein/IgG比率的確定：
測定熒光素標記抗體溶液在280 nm以及500 nm處的吸光度，用以下公式計算比率：
比率（每個IgG分子結(jié)合的熒光素分子數(shù)）=3×A500/（A280-0.2×A500）
A500：500 nm處的吸光度       A280：280 nm處的吸光度

Fluorescein Labeling Kit-NH2 注意事項
用該試劑盒標記的蛋白質(zhì)的分子量要>50,000。
 在標記過程中，IgG或者Fluorescein -IgG標記物始終存在于Filtration tube的濾膜上。
 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白質(zhì)，如BSA或明膠時，在使用該試劑盒標記前，先要純化IgG溶液。IgG溶液能夠用IgG Purification Kits（不包含于本試劑盒 中）來純化。
 如果IgG溶液含有小的不溶物，離心后取上清液來進行標記。
如果長時間不使用，建議您把試劑盒中的標記試劑NH2-reactive fluorescein放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮氣，可以更好地保持標記試劑的活性，但請不要把其它試劑和過濾管放到-20℃冰箱中，仍請放在0-5℃冰箱中保存。