NK 細(xì)胞添加劑升級(jí)方案（NK2.0）

ALyS505NK-AC 和ALyS505NK-EX 培養(yǎng)基進(jìn)行 人類NK 細(xì)胞培養(yǎng)之標(biāo)準(zhǔn)操注意事項(xiàng):
ALyS505NK(AC/EX)是專為細(xì)胞免疫治療研究而開發(fā)，不含有動(dòng)物蛋白質(zhì)成
分，含有重組或醫(yī)療級(jí)人類蛋白質(zhì)的無血清細(xì)胞培養(yǎng)基，對(duì)人類 NK 細(xì)胞具有高增
殖性，適用于 NK 細(xì)胞的活化與擴(kuò)增，是細(xì)胞免疫治療用最佳培養(yǎng)基。

【注意事項(xiàng)】
1、培養(yǎng)瓶
（1）由于部分患者 NK 細(xì)胞在誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)候可能會(huì)有貼壁現(xiàn)象，為了避免此現(xiàn)象，
建議使用懸浮培養(yǎng)專用的 75cm2;225cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶（未經(jīng)過 TC 處理或者表面
低吸附的細(xì)胞培養(yǎng)瓶）。
2、Lymactin-NK 抗體
(1)Lymactin-NK(2.4mg/mL生理鹽水溶解)保存在-20攝氏度,使用前室溫溶解盡快
使用，同時(shí)低速短時(shí)間離心保證抗體充分吸取使用。
(2) Lymactin-NK抗體培養(yǎng)瓶包被，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶數(shù)分鐘，讓溶液在培養(yǎng)培養(yǎng)瓶
表面擴(kuò)散。在室溫下孵育 1 小時(shí)，若不能及時(shí)使用為避免抗體活性下降，
Lymactin-NK抗體保存在 4℃冰箱（一周內(nèi)使用），直到使用前取出。
3、NK 細(xì)胞增殖誘導(dǎo)
（1）將血液采集至含有肝素鈉抗凝劑的試管，為避免影響細(xì)胞活性下降，請(qǐng)于 2
小時(shí)內(nèi)進(jìn)行單個(gè)核細(xì)胞分離。室溫離心力 800xg 離心 20 分鐘。如果血液儲(chǔ)存超過
2 小時(shí)，將離心時(shí)間增至 30 分鐘。
(2)由于 IL-2 在 NK 細(xì)胞誘導(dǎo)分化及擴(kuò)增作用非常重要，建議使用品質(zhì)穩(wěn)定的 IL-2
或進(jìn)口品牌(推薦諾華品牌 Proleukin；22x106IU/vial 重組人類 IL-2)。
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（3）誘導(dǎo) NK 細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞密度達(dá)到 1~1.5×106個(gè)/ml 和 5%-10%的滅活血漿才有
利于 NK 細(xì)胞的啟動(dòng)。
(4)ALyS505NK-AC/EX 使用前，必須將培養(yǎng)基進(jìn)行室溫平衡或者水浴箱溫育培
養(yǎng)基，避免低溫對(duì) NK 細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。
（5） 嚴(yán)格執(zhí)行流程確保加入抗體、細(xì)胞因子、培養(yǎng)基的計(jì)量準(zhǔn)確無誤，避免各種
成分誤差對(duì) NK細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。
（6） 整個(gè)過程以靜置培養(yǎng)為主，操作過多過猛會(huì)影響 NK細(xì)胞表型。
4、擴(kuò)大培養(yǎng)
開始活化培養(yǎng) 7 天后，培養(yǎng)培養(yǎng)瓶里的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)袋里，注意一下：
（ 1 ） 細(xì)胞轉(zhuǎn)移時(shí)，電動(dòng)移液器輕輕吹打培養(yǎng)瓶壁，避免 NK細(xì)胞損傷。
（ 2 ） 有貼壁細(xì)胞黏貼瓶壁盡量用手掌輕輕拍打培養(yǎng)瓶，不易用力過猛，避免 NK
細(xì)胞損傷。
（ 3 ） 使用細(xì)胞袋建議培養(yǎng)液體積不超過 1000ml,才有利于 NK細(xì)胞的生長(zhǎng)。
（ 4 ） 注意觀察細(xì)胞培養(yǎng)液顏色的變化和細(xì)胞計(jì)數(shù)，避免細(xì)胞培養(yǎng)過程細(xì)胞死亡。
（ 5 ） 擴(kuò)增 NK細(xì)胞 IL-2在培養(yǎng)基的含量是指每次新加入的培養(yǎng)基內(nèi)的量，不是培
養(yǎng)體系總量含有濃度。