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Rubicon Genomics R400584 ThruPLEX Tag-seq 6S（12）Kit? 12Rxns

Rubicon Genomics R400585 ThruPLEX Tag-seq 48S Kit? ? ? ? ? ?48Rxns

Rubicon Genomics R400586 ThruPLEX Tag-seq 96D Kit? ? ? ? ? ?96Rxns

構(gòu)建帶有UMT（Unique Molecular Tags）的Illumina NGS文庫(kù)

ThruPLEX? Tag-seq Kit

• 可信賴的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。ThruPLEX Tag-seq 技術(shù)提供了多達(dá)1,600萬(wàn)個(gè)分子標(biāo)簽來(lái)糾正測(cè)序誤差，

???提供可信的變異檢測(cè)分析。

• 發(fā)現(xiàn)更多，成本更低。結(jié)合基于雜交技術(shù)的目標(biāo)序列富集系統(tǒng)可分析數(shù)百個(gè)基因，同時(shí)分析突變和

???結(jié)構(gòu)變異。

• 每次都可獲得高質(zhì)量文庫(kù)。單管操作，2小時(shí)，3步操作流程。使用簡(jiǎn)便，可減少使用者操作誤差和

???污染發(fā)生。

• 省時(shí)的生物信息學(xué)分析方案。采用Curio Genomics提供的云服務(wù)軟件或開(kāi)源軟件可以快速獲得

???研究結(jié)果。

• 珍貴樣品分析成為可能。更低的DNA起始量，以往由于起始量太低而不能分析的樣品也可以分析了。

???ThruPLEX Tag-seq可以1 ng至50 ng cfDNA或片段化的dsDNA起始，兼容多種樣品類(lèi)型。

■ 產(chǎn)品說(shuō)明：

ThruPLEX Tag-seq采用帶有特別分子標(biāo)簽（UMT）的ThruPLEX引物構(gòu)建帶有分子標(biāo)記和樣品檢索引物的Illumina NGS文庫(kù)。每個(gè)試劑盒包含超過(guò)1,600萬(wàn)個(gè)特別序列用于在擴(kuò)增前標(biāo)記每條DNA片段，可以在文庫(kù)制備、目標(biāo)富集和數(shù)據(jù)分析過(guò)程中追蹤DNA片段，以檢測(cè)低豐度等位基因或計(jì)數(shù)獨(dú)立片段。采用ThruPLEX 技術(shù)設(shè)計(jì)及優(yōu)化，可以1到50 ng DNA起始構(gòu)建高多樣性、高重復(fù)性文庫(kù)。整個(gè)流程在單管或單孔中就可完成，只需3步，2小時(shí)，無(wú)需中間純化步驟和樣品轉(zhuǎn)移，避免了操作誤差和樣品損失。ThruPLEX Tag-seq Kit 包含所需全部試劑，包括可以多重標(biāo)記96個(gè)樣品的檢索引物。純化和定量后，文庫(kù)可以采用標(biāo)準(zhǔn)Illumina測(cè)序試劑和流程在Illumina NGS平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序。

圖1. 單管，三步操作流程。 ThruPLEX Tag-seq Kit以1-50 ng DNA起始構(gòu)建檢索引物文庫(kù)只需3步：末端修復(fù)，接頭連接和高保真文庫(kù)擴(kuò)增。無(wú)需純化和樣品轉(zhuǎn)移步驟。簡(jiǎn)化的工作流程，在單管或單孔中2個(gè)小時(shí)即可完成，避免樣品損失，增強(qiáng)了陽(yáng)性識(shí)別。

圖2. ThruPLEX DNA-seq Kit技術(shù)概要。ThruPLEX技術(shù)以片段化雙鏈DNA或游離DNA起始，只需3步反應(yīng)，簡(jiǎn)單高效。

圖3. 減少背景，結(jié)果更可靠。以30 ng 1% Horizon cfDNA standard，采用 ThruPLEX Tag-seq構(gòu)建文庫(kù)。Agilent SureSelect富集目標(biāo)區(qū)域，~5,000X覆蓋度測(cè)序，采用Curio Genomics生物信息學(xué)平臺(tái)分析數(shù)據(jù)。采用原始數(shù)據(jù)分析，EGFR 的突變（黃色點(diǎn)）會(huì)被背景誤差遮蓋（左圖）。而在數(shù)據(jù)分析過(guò)程中使用UMT修正誤差，突變更容易識(shí)別（右圖）。

圖4. 顯著提高信噪比，發(fā)現(xiàn)更多。以30 ng（A）或10 ng Horizon cfDNA standard采用ThruPLEX Tag-seq構(gòu)建文庫(kù)，240 KB定制panel（NimbleGen SeqCapEZ）富集目標(biāo)區(qū)域，HiSeq 2500 ~5,000X覆蓋度測(cè)序。Curio Genomics生物信息學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

*數(shù)據(jù)來(lái)源于Takara Bio Inc.

■ 產(chǎn)品組成

• Template Preparation Buffer (Red）模板準(zhǔn)備緩沖液（紅色）
• Template Preparation Enzyme (Red）模板準(zhǔn)備酶（紅色）
• Library Synthesis Buffer (Yellow）文庫(kù)合成緩沖液（黃色）
• Library Synthesis Enzyme (Yellow）文庫(kù)合成酶（黃色）
• Library Amplification Buffer（Green）文庫(kù)擴(kuò)增緩沖液（綠色）
• Library Amplification Enzyme（Green）文庫(kù)擴(kuò)增酶（綠色）
• Nuclease-Free Water（Clear）無(wú)核酸酶水
• Indexing Reagent試劑（藍(lán)色）

自備試劑：

熱循環(huán)儀（推薦使用實(shí)時(shí)儀器）

離心分離機(jī)

PCR管或96孔PCR板和密封件

低吸附濾芯槍頭

新鮮制備的80％（v / v）乙醇

Agencourt?XP核酸純化磁珠（Beckman Coulter，目錄號(hào)A63880）

■ 保存

－20℃