產(chǎn)品英文名稱：Alkaline Phosphatase Labeling Kit-NH2
產(chǎn)品中文名稱：堿性磷酸酶標(biāo)記試劑盒-NH2

Alkaline Phosphatase Labeling Kit-NH2 產(chǎn)品特性
整個(gè)標(biāo)記過(guò)程僅需3個(gè)小時(shí)                         
整個(gè)標(biāo)記過(guò)程在1支過(guò)濾管中進(jìn)行
 酶標(biāo)抗體回收率高
  
Alkaline Phosphatase Labeling Kit-NH2 產(chǎn)品描述
該試劑盒主要用于制備酶免疫分析 (EIA) 所需的堿性磷酸酶標(biāo)IgG以及競(jìng)爭(zhēng)性EIA所需的堿性磷酸酶標(biāo)抗原。該試劑盒中的NH2-reactive ALP能夠與含有NH2的蛋白質(zhì)或者其他分子反應(yīng)。該試劑盒包含了標(biāo)記過(guò)程中所需的全部試劑，包括儲(chǔ)存用緩沖液。NH2-reactive ALP不需任何活化就可以和靶分子結(jié)合。因此，當(dāng)堿性磷酸酶標(biāo)IgG用于EIA時(shí)，NH2-reactive ALP的高效性足以使它在標(biāo)記后省去純化的過(guò)程。即使在標(biāo)記后需要有一個(gè)高純度的精制過(guò)程，也只要用親和柱或凝膠滲透柱就能簡(jiǎn)單達(dá)到目的。在標(biāo)記小分子的時(shí)候，使用試劑盒中包含的過(guò)濾管即可除去分子量較大的分子。
*ALP：Alkaline Phosphatase (堿性磷酸酶)
備注：經(jīng)過(guò)同仁化學(xué)研究所的長(zhǎng)期穩(wěn)定性考驗(yàn)，代碼為L(zhǎng)K12的產(chǎn)品在0-5℃未開封的條件下由原來(lái)可以保存半年延長(zhǎng)至一年。

Alkaline Phosphatase Labeling Kit-NH2 試劑盒內(nèi)容
NH2-reactive ALP...................100 µg × 3管      
Reaction buffer.....................200 µl × 1管      
Filtration tube........................3支
Washing buffer...........4 ml × 1瓶
Storage buffer.............4 ml × 1瓶

標(biāo)記IgG操作步驟
（1）將100 μl Washing buffer以及含有50-200 μg IgG的樣品溶液加入到過(guò)濾管中。a）
（2）8,000-10,000 g離心10分鐘后，加入100 μl Washing buffer再離心一次。b）
（3）將10 μl Reaction buffer加入到NH2-reactive ALP中并用移液器吹打使其溶解。
（4）將含有NH2-reactive ALP的溶液轉(zhuǎn)移到IgG所集中的過(guò)濾管的濾膜上。
（5）用移液器吸取溶液吹洗凈整個(gè)濾膜表面，然后將過(guò)濾管放入培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)2小時(shí)。
（6）加入190 μl Storage buffer 并吹打10到15次來(lái)回收標(biāo)記產(chǎn)物。c）將溶液轉(zhuǎn)移至0.5ml的試管中，并儲(chǔ)    存于0-5℃下。d）
  a）推薦的IgG的量為100 μg，樣品溶液的體積不應(yīng)超過(guò)100 μl。如果抗體濃度低于0.5 mg/ml，重復(fù)步驟1和2直至總的IgG聚積量達(dá)到50-200 μg。
  b）如果溶液在離心后仍然殘留在膜上，可以再離心5分鐘或者適當(dāng)增加轉(zhuǎn)速。
  c）標(biāo)記后共軛物的濃度為0.5-1.3 mg/ml。在進(jìn)行后續(xù)的酶免疫，免疫印跡，免疫轉(zhuǎn)染試驗(yàn)前先要將標(biāo)記后的IgG稀釋至適當(dāng)?shù)臐舛取Ｃ總€(gè)IgG分子上會(huì)被標(biāo)記上1到3個(gè)堿性磷酸酶分子。沒(méi)有被結(jié)合的堿性磷酸酶不會(huì)干擾正常的免疫試驗(yàn)。如果一定要純化的話，可以使用凝膠滲透柱或親合柱。
  d）通常，堿性磷酸酶標(biāo)記后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能夠保存2個(gè)月，如果需要保存更久，可以在-20℃下存放。但還要注意樣品自身是否穩(wěn)定。
標(biāo)記小分子操作步驟：
（1）用Reaction buffer制備50 μl，1 mM的氨基化合物，a）并將該溶液加入到NH2-reactive ALP管中。吹打數(shù)次使其充分混合，然后置于37℃下培養(yǎng)1小時(shí)。
（2）將100 μl Washing buffer加入到反應(yīng)液中并將整個(gè)溶液全部移入過(guò)濾管中。
（4）加入200 μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次來(lái)回收標(biāo)記產(chǎn)物。c）將溶液轉(zhuǎn)移至0.5 ml的試管中，并儲(chǔ)存于0-5℃下。d）
  a）如果氨基化合物在水溶液中無(wú)法溶解，可以用DMSO使其溶解，制備成10 mM的溶液，取5 μl與45 μl Reaction buffer混合。
  b）如果溶液在離心后仍然殘留在膜上，可以再離心5分鐘或者適當(dāng)增加轉(zhuǎn)速。
  c）標(biāo)記產(chǎn)物的濃度大約為400-500 μg/ml（10-12.5 μM）。1-2個(gè)靶分子能夠和1個(gè)堿性磷酸酶分子結(jié)合。
  d）標(biāo)記后的小分子在0-5℃下能夠存放至少6個(gè)月。

Alkaline Phosphatase Labeling Kit-NH2 注意事項(xiàng)
所需標(biāo)記的較大的蛋白質(zhì)的分子量要>50,000。
所需標(biāo)記的較小的氨基化合物的分子量要<5,000。
標(biāo)記過(guò)程中，標(biāo)記前后的IgG總是在過(guò)濾管的濾膜上。
如果IgG溶液含有其它分子量超過(guò)10,000的蛋白質(zhì)，如BSA或凝膠，在使用該試劑盒標(biāo)記前請(qǐng)先純
化IgG溶液。IgG溶液能夠使用IgG純化試劑盒來(lái)純化 (不包含于此試劑盒中)。
如果IgG溶液中含有小的不溶物，離心后提取上清液來(lái)標(biāo)記。
如果長(zhǎng)時(shí)間不使用，建議您把試劑盒中的酶NH2-reactive ALP放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮?dú)?，可以更好地保持酶的活性，但?qǐng)不要把其它試劑和過(guò)濾管放到-20℃冰箱中，仍請(qǐng)放在0-5℃冰箱中保存。