R-Phycoerythrin Labeling Kit - NH2
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產(chǎn)品英文名稱:R-Phycoerythrin Labeling Kit - NH2
產(chǎn)品中文名稱:藻紅蛋白標(biāo)記試劑盒-NH2
R-Phycoerythrin Labeling Kit - NH2 產(chǎn)品特性
整個標(biāo)記過程僅需1個小時
整個標(biāo)記過程在1支過濾管中進(jìn)行
熒光標(biāo)記抗體回收率高
適用于50-200 μg的IgG
R-Phycoerythrin Labeling Kit - NH2 產(chǎn)品描述
藻膽蛋白是一種從藍(lán)藻和真核藻類中得到的熒光蛋白,它的熒光強度要比化學(xué)熒光探針,如熒光素和羅丹明高得多。因此,用藻膽蛋白標(biāo)記的抗體和其他分子在做流式細(xì)胞術(shù)和免疫染色時具有很高的靈敏度。R-藻紅蛋白(R-PE)是一種藻膽蛋白,它在578 nm附近有紅色熒光,激發(fā)波長為488 nm。R-Phycoerythrin Labeling Kit-NH2能夠簡便快速地制備被R-PE標(biāo)記的IgG,NH2-reactive R-PE(該試劑盒的成分之一)具有一個活性的酯基團(tuán),不需任何活化能夠輕易地與靶分子中的氨基形成共價鍵。試劑盒中的Filtration tube用來快速交換緩沖液和濃縮樣品IgG溶液。該試劑盒中包含了包括標(biāo)記產(chǎn)物的儲存液等用于R-PE標(biāo)記的所需的全部試劑。
*R-PE: R-Phycoerythrin(R-藻紅蛋白)
R-Phycoerythrin Labeling Kit - NH2 試劑盒內(nèi)容
- NH2-Reactive R-Phycoerythrin ................. 3 tubes
- WS Buffer ............................................... 4 ml X 1 bottle
- Reaction Buffer ........................................ 200 X 1 tube
- Filtration Tube .......................................... 3 tubes
標(biāo)記IgG操作步驟
(1)將100 μl WS buffer以及含有100 μg IgG的樣品溶液加入到過濾管中。a)
(2)8,000-10,000 g離心10分鐘后,加入100 μl Washing buffer再離心一次。b)
(3)完成離心后,將10 μl Reaction buffer加入到NH2-reactive R-PE中并用移液槍吹打使其溶解。
(4)將含有NH2-reactive R-PE的溶液轉(zhuǎn)移到IgG所集中的過濾管的濾膜上。
(5)用移液器吸取溶液吹洗凈整個濾膜表面,然后將過濾管放入培養(yǎng)箱中,37℃培養(yǎng)2小時。
(6)將190 μl WS buffer加入到過濾管中并用移液器吹打10到15次來回收標(biāo)記產(chǎn)物。c) 將溶液轉(zhuǎn)移至0.5 ml的試管中,并儲存于0-5℃下。d)
a)樣品溶液的體積不應(yīng)超過100 μl。如果抗體濃度低于0.5 mg/ml,重復(fù)步驟1和2直至總的IgG聚積量達(dá)到100 μg。
b)如果溶液在離心后仍然殘留在膜上,可以再離心5分鐘或者適當(dāng)增加轉(zhuǎn)速。
c)標(biāo)記后產(chǎn)物的濃度為1.4-1.8 mg/ml。在進(jìn)行后續(xù)的酶免疫,免疫印跡,免疫轉(zhuǎn)染試驗前先要將標(biāo)記后的IgG稀釋至適當(dāng)?shù)臐舛?。每個IgG分子上會被標(biāo)記上1-2個R-PE分子。沒有被結(jié)合的R-PE可能會干擾正常的免疫試驗。如果需要純化的話,可以使用凝膠滲透柱或親合柱。
d)通常R-PE標(biāo)記后的IgG在Storage buffer中,0-5℃下至少能夠保存2個月,如果需要保存更久,可以添加等量的丙三醇(終濃度:50%),并在-20℃下存放。但是,還要注意樣品自身是否穩(wěn)定。
R-Phycoerythrin Labeling Kit - NH2 注意事項
用該試劑盒標(biāo)記的蛋白質(zhì)的分子量應(yīng)當(dāng)>50,000。
在標(biāo)記過程中,IgG或者R-Phycoerythrin-IgG標(biāo)記物始終在Filtration tube的濾膜上。
如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白質(zhì),如BSA或明膠時,在使用該試劑盒標(biāo)記前,先要純化IgG 溶液。IgG溶液能夠用IgG Purification Kits(不包含于本試劑盒中)來純化。
如果IgG溶液含有小的不溶物,離心后取上清液來進(jìn)行標(biāo)記。
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