產(chǎn)品英文名稱(chēng)：Biotin Labeling Kit-NH2 (for 1mg)
產(chǎn)品中文名稱(chēng)：生物素標(biāo)記試劑盒- NH2 (for 1mg)
Biotin Labeling Kit-NH2 (for 1mg) 產(chǎn)品特性
整個(gè)標(biāo)記過(guò)程僅需1個(gè)小時(shí)
整個(gè)標(biāo)記過(guò)程在1支過(guò)濾管中進(jìn)行
熒光標(biāo)記抗體回收率高
適用于50-200 μg的IgG
Biotin Labeling Kit-NH2 (for 1mg) 產(chǎn)品描述
該試劑盒主要用于制備生物素標(biāo)記的蛋白質(zhì)，用于酶免疫分析（EIA）。NH2-reactive biotin是試劑盒的成分之一，它含有琥珀酰亞胺基（NHS），能與蛋白質(zhì)或者其它分子的氨基反應(yīng)。該試劑盒中包含了標(biāo)記所需的全部試劑，標(biāo)記過(guò)程十分簡(jiǎn)便。只需將NH2-reactive biotin加入到IgG溶液中，37℃培養(yǎng)10分鐘即可。每個(gè)IgG分子平均能夠和5-8個(gè)生物素分子結(jié)合。過(guò)量的生物素分子能夠使用過(guò)濾管將其除去。
Biotin Labeling Kit-NH2 (for 1mg) 試劑盒內(nèi)容
- NH2-Reactive Biotin x 1
- WS Buffer 13 ml x 1
- Reaction Buffer 1.2 ml x 1
- Filtration Tube x 1
- 15 ml Tube (for counterbalance) x 1
標(biāo)記IgG操作步驟
（1）將100 μl WS buffer以及含有100 μg IgG的樣品溶液加入到過(guò)濾管中。a）
（2）8,000-10,000 g離心10分鐘。b）
（3）將10 μl DMSO加入到NH2-reactive biotin中并用移液器吹打使其溶解。c）
（4）將100 μl Reaction buffer以及8 μl NH2-reactive biotin溶液加入到過(guò)濾管中，吹打使其混合。d）
（5）將過(guò)濾管放入培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)10分鐘。
（6）將100 μl WS buffer加入到過(guò)濾管中，8,000-10,000 g離心10分鐘，b）除去濾液。
（7）將200 μl WS buffer加入到過(guò)濾管中，8,000-10,000 g離心10分鐘，b）重復(fù)該步驟一次。
（8）將200 μl WS buffer加入到過(guò)濾管中吹打10-15次來(lái)回收標(biāo)記產(chǎn)物。e）將該溶液轉(zhuǎn)移到0.5 ml試管中，在0-5℃下保存。
a）樣品溶液的體積不應(yīng)超過(guò)100 μl。如果抗體濃度低于1 mg/ml，重復(fù)步驟1和2直至總的IgG聚積量達(dá)到100 μg。如果聚積過(guò)程中濾液的體積超過(guò)400 μl，則在進(jìn)行后續(xù)的離心操作前應(yīng)除去濾液。
b）如果溶液在離心后仍然殘留在膜上，可以再離心5分鐘或者適當(dāng)增加轉(zhuǎn)速。
c）NH2-reactive biotin在管子的底部，向管底加入10 μl DMSO，吹打數(shù)次使其溶解。
d）如果IgG的量為200 μg，在步驟4時(shí)加入所有的NH2-reactive biotin溶液。
e）并不一定要使用WS buffer來(lái)回收標(biāo)記產(chǎn)物，可以選擇任何適合于該實(shí)驗(yàn)的緩沖液來(lái)替代。
IgG Biotin Biotin Labeling Kit-NH2 (for 1mg) 注意事項(xiàng)
用該試劑盒標(biāo)記的蛋白質(zhì)的分子量要>50,000。
在標(biāo)記過(guò)程中，IgG或者biotin-IgG標(biāo)記物始終在Filtration tube的濾膜上。
如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白質(zhì)，如BSA或明膠時(shí)，在使用該試劑盒標(biāo)記前，先要純化IgG溶液。IgG溶液能夠用IgG Purification Kits（不包含于本試劑盒中）來(lái)純化。
如果IgG溶液含有小的不溶物，離心后取上清液來(lái)進(jìn)行標(biāo)記。
如果長(zhǎng)時(shí)間不使用，建議您把試劑盒中的標(biāo)記試劑NH2-reactive biotin放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮?dú)?，可以更好地保持?biāo)記試劑的活性，但請(qǐng)不要把其它試劑和過(guò)濾管放到-20℃冰箱中，仍請(qǐng)放在0-5℃冰箱中保存。
