Fura 2-AM
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產(chǎn)品英文名稱:Fura 2-AM
產(chǎn)品中文名稱:Fura 2-AM 鈣離子熒光探針
Fura 2-AM 鈣離子熒光探針產(chǎn)品簡(jiǎn)介
分 子 式: C44H47N3O24
分 子 量: 1001.85
外 觀: 黃色或橙黃色粉末
別 名: Fura 2-AM
純 度: 98%以上(HPLC)
儲(chǔ)存條件: -20℃
運(yùn)輸條件: 室溫
Fura 2-AM 鈣離子熒光探針產(chǎn)品特性
Fura 2是最常用的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一,F(xiàn)ura 2-AM(鈣離子熒光探針)需用無(wú)水DMSO(anhydrous DMSO)溶解。
Fura 2對(duì)Quin 2的熒光特性做了改進(jìn)。1 μM Fura 2結(jié)合后的信號(hào)強(qiáng)度相當(dāng)于30 μM的Quin 2結(jié)合后的信號(hào)強(qiáng)度。這樣就保證在實(shí)驗(yàn)中可以使用比Quin 2的濃度低得多的Fura 2指示劑。Fura 2是一種使用最廣泛的比率測(cè)量的鈣熒光指示劑。目前適用于Fura 2實(shí)驗(yàn)的設(shè)備有很多,它特別適合于用數(shù)字成像顯微鏡來(lái)檢測(cè)。它比Indo 1更不易受到光褪色作用的影響。細(xì)胞形狀的改變有時(shí)候會(huì)影響340 nm和380 nm的熒光比率,比如,平滑肌收縮會(huì)同時(shí)引起這些波長(zhǎng)的熒光信號(hào)強(qiáng)度的減小。另外,對(duì)于血管來(lái)說(shuō),340 nm的信號(hào)強(qiáng)度的增加會(huì)因?yàn)檠苁湛s而趨向于變小,而380 nm信號(hào)強(qiáng)度的減小會(huì)因?yàn)檠苁湛s而變大。Fura 2-AM是Fura 2的一種乙酰甲酯衍生物,通過(guò)培養(yǎng),能夠輕易地負(fù)載到細(xì)胞中。
Fura 2可以和鈣離子(Ca2+)結(jié)合,結(jié)合鈣離子后在330-350 nm激發(fā)光下可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光,而在380 nm激發(fā)光下則會(huì)導(dǎo)致熒光減弱。這樣就可以使用340 nm和380 nm這兩個(gè)熒光的比值來(lái)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度,可以消除不同細(xì)胞樣品間熒光探針裝載效率的差異,熒光探針的滲漏,細(xì)胞厚度差異等誤差因素。
Fura 2-AM是一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。Fura 2-AM的熒光比較弱,最大激發(fā)波長(zhǎng)為369 nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為478 nm,并且其熒光不會(huì)隨鈣離子濃度改變而改變。Fura 2-AM進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fura 2,從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fura 2和鈣離子結(jié)合后,最大激發(fā)波長(zhǎng)為335 nm(最大激發(fā)波長(zhǎng)隨離子濃度的的不同而有所不同),最大發(fā)射波長(zhǎng)為505nm。實(shí)際檢測(cè)時(shí)推薦使用的激發(fā)波長(zhǎng)為340nm,發(fā)射波長(zhǎng)為510 nm。如果做雙波長(zhǎng)檢測(cè),則推薦使用的激發(fā)波長(zhǎng)為340 nm和380 nm。
Fura 2-AM 鈣離子熒光探針使用注意事項(xiàng)
1.試劑容易吸潮,從冰箱取出后,請(qǐng)確認(rèn)在干燥的環(huán)境放至室溫后再開(kāi)封。由于試劑極其微量,開(kāi)封前,請(qǐng)輕彈管壁幾次,以保證粉末落入管底。
2.第一次使用時(shí), 建議母液即配即用。試劑溶解后盡可能在短時(shí)間內(nèi)使用,以保證實(shí)驗(yàn)效果。
3.溶解液DMSO需要保證新鮮無(wú)水,否則將會(huì)導(dǎo)致AM體水解,使熒光染料無(wú)法進(jìn)入細(xì)胞,影響實(shí)驗(yàn)效果。
4.母液遇水極易分解,如果不能一次用完,建議分裝保存,例如分裝成5 μl/管,用封口膜封口,并用鋁箔紙包裹,放在一個(gè)密閉性能好的塑料袋中,并放入一包干燥劑,在≤-20℃密封避光保存。
5.建議您在正式實(shí)驗(yàn)前先摸索一下細(xì)胞量、鈣離子熒光探針的終濃度、培養(yǎng)時(shí)間等,找到最佳實(shí)驗(yàn)條件。
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