說實話,我相信這個年大家沒有過好,和你一樣,華雅思創(chuàng)生物也一直在關(guān)注這場突然爆發(fā)的新型冠狀病毒肺炎。這個
新型冠狀病毒是什么?
2019新型冠狀病毒,即“2019-nCoV”,因2019年武漢病毒性肺炎病例而被發(fā)現(xiàn),2020年1月12日被世界衛(wèi)生組織命名,其中2019代表最早出現(xiàn)的年份,n代表Novel(新的),Cov代表Coronavirus(冠狀病毒)。
以前從未在人體中發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒新毒株。冠狀病毒是一個大型病毒家族,部分冠狀病毒以鼻塞、流涕、打噴嚏等“普通感冒”癥狀為主,但是SARS-CoV、MERS-CoV和2019-nCoV三種冠狀病毒具有較高的致病性。
(圖片選自自復(fù)旦大學附屬中山醫(yī)院高曉東醫(yī)生)
很快在2020 年 1 月 10 日,新型冠狀病毒的基因組被破譯。該病毒測序由復(fù)旦大學生物醫(yī)學研究院張永振教授領(lǐng)導的協(xié)作團隊完成。悉尼大學的 Edward C. Holmes 代表團隊上傳結(jié)果,并最先在 Twitter 公布了這一消息。目前該病毒序列在 virologic.org 網(wǎng)站中可以查詢,也已經(jīng)上傳到了 GenBank 中。
序列下載地址如下:http://virological.org/t/initial-genome-release-of-novel-coronavirus/319
對抗當前的疫情,快速檢測方法的可以快速確診病人,快速隔離,快速采取措施。因此,各家科研機構(gòu)以及相關(guān)的企業(yè),特別是體外診斷企業(yè)、測序公司、大學、研究所以及疾控系統(tǒng)等,在這次新冠狀病毒的檢測產(chǎn)品開發(fā)中,扮演了重要的角色。這里簡要介紹一下新冠狀病毒的檢測技術(shù)。
新冠狀病毒相關(guān)檢測技術(shù)
世界衛(wèi)生組織及國家推薦的檢測方法是檢測病毒的基因,通過熒光定量RT-qPCR的方法或者是基因測序的方法。其它的方法很難達到實際檢測所要求的靈敏度,這里基本不予考慮。測序方法由于比較慢,價格也比較昂貴,適合從事研究但不適合作為篩查手段。
檢測核酸的方法中,由于這次的新冠狀病毒是RNA病毒,所以需要加入一步反轉(zhuǎn)錄的過程,再進行PCR擴增。目前的檢測方法有熒光定量PCR方法和等溫擴增的方法,還有數(shù)字PCR技術(shù)以及基于試紙檢測的方法。還有一些研究的目標是加快樣品前處理,提升檢測通量和自動化水平,以及降低對設(shè)備的要求,對檢測人員的要求并且降低成本。
目前試劑盒檢測的標本主要是咽拭子、痰液、肺泡灌洗液、血清及血漿等。
QIAamp Viral RNA Mini Kit 病毒RNA試劑盒
貨號:52904
性能
使用QIAamp Viral RNA Mini Kit分離的高質(zhì)量病毒RNA在廣泛的下游應(yīng)用中表現(xiàn)良好,包括病毒基因分型,病毒流行病學和傳染病研究
原理
QIAamp Viral RNA Mini Kit通過快速旋轉(zhuǎn)柱或真空程序簡化了病毒RNA與無細胞體液的分離。不需要苯酚 – 三氯甲烷提取。當污染物通過時,病毒RNA特異性結(jié)合QIAamp硅膠膜。在兩個有效的洗滌步驟中完全除去PCR抑制劑,例如二價陽離子和蛋白質(zhì),留下純的病毒RNA在水或試劑盒提供的緩沖液中洗脫。
QIAamp RNA技術(shù)從無細胞體液中提取病毒RNA,可用于RT-PCR和印跡程序。QIAamp樣品制備技術(shù)已獲得完全許可。
從血漿中純化的1026nt RNA片段的RT-PCR產(chǎn)物。將連續(xù)十倍稀釋液(如所示)加入血漿中并使用QIAamp Viral RNA Mini Kit純化。
M:標記;?C:陰性對照
程序
優(yōu)化的緩沖液和酶可溶解樣品,穩(wěn)定核酸,并增強對QIAamp膜的選擇性RNA吸附。為了保證RNA完整性,在高度變性條件下裂解樣品以滅活RNA酶。加入酒精并將裂解物加載到QIAamp旋轉(zhuǎn)柱上。使用洗滌緩沖液除去雜質(zhì),然后將純的即用型RNA在水或低鹽緩沖液中洗脫。
QIAamp Viral RNA Mini Kit可在QIAcube上自動化。QIAamp Viral RNA Mini Accessory Set使用QIAcube和QIAamp Viral RNA Mini Kit提供自動化,低通量樣品制備所需的額外緩沖液和試劑。
真空處理
為了提高RNA純化的速度和方便性,可以通過真空而不是離心處理樣品。QIAamp Mini旋轉(zhuǎn)柱使用QIAamp Vac附件套件中提供的VacValves和VacConnectors安裝在QIAvac 24歧管上。如果樣品流速顯著不同,使用VacValves,以確保真空。一次性VacConnector用于避免任何交叉污染。
應(yīng)用
QIAamp Viral RNA Mini Kit簡化了從無細胞體液中純化病毒RNA,提供快速旋轉(zhuǎn)柱或真空程序,或QIAcube上的自動化。
樣本類型包括:
血漿和血清
CSF
尿
其他無細胞體液
細胞培養(yǎng)上清液
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