在做慢病毒包裝實驗中,有科研小伙伴常遇到:用同樣的病毒載體系統(tǒng)進行病毒包裝實驗,為什么有人做的很好,次次成功,有人卻是時常做不出來,穩(wěn)定性很差,不是滴度低就是沒有轉(zhuǎn)進去?花費了大量的時間和精力去找原因,實在是很心酸呢!
慢病毒包裝有幾個關(guān)鍵因素:細胞因素、載體系統(tǒng)、質(zhì)粒抽提純化情況
用低代數(shù)的細胞293T細胞非常重要?。‘?dāng)然也要保證細胞狀態(tài)特別好,沒有細微污染,鋪板均勻。飽滿狀態(tài)好的細胞才可以產(chǎn)生較高滴度的病毒哦!
在實驗中最常見的慢病毒載體系統(tǒng)有三質(zhì)粒系統(tǒng)、四質(zhì)粒系統(tǒng),當(dāng)然使用三質(zhì)粒系統(tǒng)的小伙伴居多,一定要選擇成熟商業(yè)化的載體系統(tǒng)!
我們要注意是否構(gòu)建時導(dǎo)致質(zhì)粒載體重組或某個部件缺失,或污染別的質(zhì)粒、雜物?中抽純化是否污染?要養(yǎng)成同時做陰性對照的習(xí)慣:建議目的基因載體和陰性對照GFP 載體是同一批,且建議每次包裝都如此操作,要保證目的基因的表達載體構(gòu)建純化良好,質(zhì)粒間比例得當(dāng),并且對質(zhì)粒進行酶切驗證。
如果以上都沒有問題,那么最最最重要的環(huán)節(jié)就是慢病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細胞了,轉(zhuǎn)染效果直接影響著出毒效率,那么一款好的轉(zhuǎn)染試劑在此時就是至關(guān)重要了!在這里給大家推薦一款性價比超高的轉(zhuǎn)染試劑,美國Polysciences家的PEI MAX 40K!
PEI MAX 40K(也稱為游離堿PEI 22K)是一種功能強大,值得信賴且經(jīng)濟高效的瞬時轉(zhuǎn)染試劑。在HEK293和CHO表達系統(tǒng)中,能在96孔板至100L生物反應(yīng)器范圍內(nèi)提供始終如一高效的基因表達。越來越多的研究人員和公司使用PEI來替代其他類型轉(zhuǎn)染試劑,以獲得他們所需要的優(yōu)勢。相較于其他類型轉(zhuǎn)染試劑,使用自行制備的PEI轉(zhuǎn)染試劑可以使總轉(zhuǎn)染成本降低高達40%左右。
Thomas M,et al(2005)研究數(shù)據(jù)表明,去乙?;?strong>PEI40000(Polyethylenimine MAX40000)體外質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率提高21倍,小鼠體內(nèi)靶向效率達到10000倍,隨之肺部特異療效顯示增強1500倍。
這么好的效果,你一定知道美國Polysciences公司!
美國Polysciences公司是一家成立于1961年,致力于特殊技精細化學(xué)試劑、實驗室產(chǎn)品,單/多聚體等產(chǎn)品的研發(fā)供應(yīng),所提供的產(chǎn)品服務(wù)于組織學(xué)(顯微技術(shù))、生物技術(shù)、電子技術(shù)、護理及制藥工程等多個領(lǐng)域。起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案,幫助科學(xué)家揭示未知領(lǐng)域。隨后,開拓了在病理(組織研究)應(yīng)用產(chǎn)品,使組織除了石蠟包埋外,還能夠包埋在塑料塊中;開發(fā)染料和染色劑,以實現(xiàn)更好的樣品觀測方式。與政府機構(gòu)合作,開發(fā)了用于診斷試劑盒應(yīng)的聚合物微球。與美國國家癌癥中心合作,開發(fā)天然產(chǎn)物分離和純化產(chǎn)品,并用于紫杉醇的初步臨床試驗。繼而開發(fā)出超順磁珠,用于DNA、蛋白質(zhì)和肽的研究。Polysciences的高純度單體和聚合物產(chǎn)品在醫(yī)療器械中有許多應(yīng)用,并不斷開發(fā)和增強其性能。公司秉承為應(yīng)用而研發(fā),目前已擁有超過3000種產(chǎn)品。
質(zhì)量保證
功能強大、經(jīng)濟實惠、安全可靠
這么好的轉(zhuǎn)染試劑,難道你不心動嗎?
華雅思創(chuàng)生物經(jīng)營品牌
經(jīng)過幾年的不懈努力,華雅思創(chuàng)生物提供的產(chǎn)品覆蓋免疫細胞治療、干細胞治療、干細胞基礎(chǔ)研究、動物模型疾病研究、基因檢測(NGS)、試管嬰兒、產(chǎn)品質(zhì)控等諸多熱點科學(xué)研究領(lǐng)域。如今,華雅思創(chuàng)已經(jīng)成為Lifeline、Takara、Origen、Corning、BD、Peprotech、illumina、BECKMAN、LONZA、CellGenix、Stemcell、Labobanker2、Gibco、StemRD、PreAnalytiX、Irvine Scientific、eBioscience、CSTI等五十余家國際知名企業(yè)代理商,為中國廣大科研伙伴提供全面解決方案!
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