RNA表達水平高度動態(tài),并集成了遺傳和表觀遺傳學(xué)的調(diào)控機制,可以作為極佳的分標記物指示細胞的功能狀態(tài)。近年來,轉(zhuǎn)錄組分析在癌癥研究中的廣泛應(yīng)用業(yè)已證明,RNA與蛋白質(zhì)一樣可以作為臨床診斷、治療評估及預(yù)后預(yù)測的生物學(xué)指標。為了充分利用RNA作為生物學(xué)標記物的這些潛力, 迫切需要開發(fā)出有效的方法來常規(guī)檢測RNA 。
目前用RNA表達水平檢測的實驗技術(shù)較為常用的是:
1.RNA熒光原位雜交(RNA-FISH)技術(shù)用于在細胞中定位和定量特定的RNA分子。這項技術(shù)不僅有助于揭示基因表達的時空模式,還為研究者提供了關(guān)于細胞活動和疾病機制的獨特見解。RNA-FISH技術(shù)的歷史可以追溯到20世紀80年代,當時科學(xué)家們開始嘗試在細胞中直接檢測RNA。然而,由于RNA的天然低豐度及易降解特性,這一技術(shù)的開發(fā)面臨巨大挑戰(zhàn)。直到20世紀90年代,隨著探針設(shè)計的改進和新熒光染料的出現(xiàn),RNA-FISH才開始在科研中得到廣泛應(yīng)用。RNA-FISH技術(shù)的原理基于探針與靶序列的特異性結(jié)合。首先,研究人員會設(shè)計出與目標RNA序列互補的熒光探針。這些探針在雜交緩沖液中與細胞中的目標RNA結(jié)合,形成探針-靶RNA復(fù)合物。然后,通過洗滌步驟去除未結(jié)合的探針,最后用熒光顯微鏡觀察雜交信號的位置和數(shù)量。熒光原位雜交技術(shù)具有高度的特異性和敏感性,可以在細胞和組織水平上提供準確的分子信息。它已成為生命科學(xué)研究和臨床診斷中不可或缺的工具之一。熒光原位雜交市場在過去幾年中呈現(xiàn)穩(wěn)定增長,預(yù)計將繼續(xù)保持增長趨勢,該市場的價值預(yù)計將在未來幾年內(nèi)達到數(shù)億美元。目前ACD公司旗下的RNAscope?正是可滿足這一需求的新型的RNA原位雜交技術(shù),它可在組織和細胞中檢測目標RNA,繪制真實而重要的信號通路和關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)。該技術(shù)基于其獨特的探針設(shè)計與背景抑制技術(shù),并且融合了傳統(tǒng)RNA原位雜交技術(shù)與FISH技術(shù)的優(yōu)點,在單細胞水平,實現(xiàn)了單個RNA的可視化,代表了RNA原位雜交領(lǐng)域的一項重大進步,是目前最精準的RNA檢測技術(shù)。目前,RNA熒光原位雜交技術(shù)在生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用場景非常廣泛。例如,在基因功能研究方面,研究人員可以利用這項技術(shù)檢測特定基因在細胞內(nèi)的表達模式。在腫瘤診療領(lǐng)域,RNA-FISH可以用于檢測與癌癥相關(guān)的基因異常表達,從而為疾病的診斷和治療提供參考。此外,RNA-FISH技術(shù)還可以用于研究病毒感染、神經(jīng)科學(xué)和藥理學(xué)等多個領(lǐng)域。
2.空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)自斬獲了Nature Methods 2020 年“年度技術(shù)”以來,引起更加廣泛的關(guān)注。目前空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)全球規(guī)模約4億美元,50%用戶在北美,未來十年年成長率在25%以上。中國的用戶規(guī)模有望達到全球的20-30%,年成長率在40%以上。然而,空間轉(zhuǎn)錄組的研究還需要擴展檢測數(shù)量和分析工具,同樣地,空間背景下的分辨率、規(guī)模和信息種類也需要提高。
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