在做慢病毒包裝實驗中,有科研小伙伴常遇到:用同樣的病毒載體系統(tǒng)進行病毒包裝實驗,為什么有人做的很好,次次成功,有人卻是時常做不出來,穩(wěn)定性很差,不是滴度低就是沒有轉進去?花費了大量的時間和精力去找原因,實在是很心酸呢!
慢病毒包裝有幾個關鍵因素:細胞因素、載體系統(tǒng)、質粒抽提純化情況
用低代數的細胞293T細胞非常重要!!當然也要保證細胞狀態(tài)特別好,沒有細微污染,鋪板均勻。飽滿狀態(tài)好的細胞才可以產生較高滴度的病毒哦!
在實驗中最常見的慢病毒載體系統(tǒng)有三質粒系統(tǒng)、四質粒系統(tǒng),當然使用三質粒系統(tǒng)的小伙伴居多,一定要選擇成熟商業(yè)化的載體系統(tǒng)!
我們要注意是否構建時導致質粒載體重組或某個部件缺失,或污染別的質粒、雜物?中抽純化是否污染?要養(yǎng)成同時做陰性對照的習慣:建議目的基因載體和陰性對照GFP 載體是同一批,且建議每次包裝都如此操作,要保證目的基因的表達載體構建純化良好,質粒間比例得當,并且對質粒進行酶切驗證。
如果以上都沒有問題,那么最最最重要的環(huán)節(jié)就是慢病毒質粒轉染293T細胞了,轉染效果直接影響著出毒效率,那么一款好的轉染試劑在此時就是至關重要了!在這里給大家推薦一款性價比超高的轉染試劑,美國Polysciences家的PEI MAX 40K!
PEI MAX 40K(也稱為游離堿PEI 22K)是一種功能強大,值得信賴且經濟高效的瞬時轉染試劑。在HEK293和CHO表達系統(tǒng)中,能在96孔板至100L生物反應器范圍內提供始終如一高效的基因表達。越來越多的研究人員和公司使用PEI來替代其他類型轉染試劑,以獲得他們所需要的優(yōu)勢。相較于其他類型轉染試劑,使用自行制備的PEI轉染試劑可以使總轉染成本降低高達40%左右。
Thomas M,et al(2005)研究數據表明,去乙?;?strong>PEI40000(Polyethylenimine MAX40000)體外質粒DNA轉染效率提高21倍,小鼠體內靶向效率達到10000倍,隨之肺部特異療效顯示增強1500倍。
這么好的效果,你一定知道美國Polysciences公司!
美國Polysciences公司是一家成立于1961年,致力于特殊技精細化學試劑、實驗室產品,單/多聚體等產品的研發(fā)供應,所提供的產品服務于組織學(顯微技術)、生物技術、電子技術、護理及制藥工程等多個領域。起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案,幫助科學家揭示未知領域。隨后,開拓了在病理(組織研究)應用產品,使組織除了石蠟包埋外,還能夠包埋在塑料塊中;開發(fā)染料和染色劑,以實現更好的樣品觀測方式。與政府機構合作,開發(fā)了用于診斷試劑盒應的聚合物微球。與美國國家癌癥中心合作,開發(fā)天然產物分離和純化產品,并用于紫杉醇的初步臨床試驗。繼而開發(fā)出超順磁珠,用于DNA、蛋白質和肽的研究。Polysciences的高純度單體和聚合物產品在醫(yī)療器械中有許多應用,并不斷開發(fā)和增強其性能。公司秉承為應用而研發(fā),目前已擁有超過3000種產品。
質量保證
功能強大、經濟實惠、安全可靠
這么好的轉染試劑,難道你不心動嗎?
華雅思創(chuàng)生物經營品牌
經過幾年的不懈努力,華雅思創(chuàng)生物提供的產品覆蓋免疫細胞治療、干細胞治療、干細胞基礎研究、動物模型疾病研究、基因檢測(NGS)、試管嬰兒、產品質控等諸多熱點科學研究領域。如今,華雅思創(chuàng)已經成為Lifeline、Takara、Origen、Corning、BD、Peprotech、illumina、BECKMAN、LONZA、CellGenix、Stemcell、Labobanker2、Gibco、StemRD、PreAnalytiX、Irvine Scientific、eBioscience、CSTI等五十余家國際知名企業(yè)代理商,為中國廣大科研伙伴提供全面解決方案!
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