由干細胞搜丨干細胞搜網(wǎng)編輯: 血清請先按上述“血清應如何融解”中的操作步驟融化和混勻,熱滅活時請將血清置于56℃水浴30分鐘。為盡量減少熱滅活對血清品質(zhì)的影響,一次滅活的血清體積不宜過大。最好準備同樣的容器裝相等體積的水(與血清相同溫度),滅活時將裝有血清和水的容器同時放入56℃水浴, 在裝水的容器中放置溫度計,加熱過程中不時輕輕旋轉(zhuǎn)混勻血清,當溫度計顯示達到56℃左右,開始計時。56 ℃水浴后,建議馬上轉(zhuǎn)移到冰上降溫。
? 正常情況下,融化后血清的外觀顏色應該是?
血清為動物來源,成分復雜,不同批次間會存在一些外觀上的差別。一般情況下,它們的顏色可能是金黃色、紅色、琥珀棕色或者是介于三者之間。
? 血清應如何保存?
未拆封的血清應存放于-15至-20℃,避免反復凍融。拆封后的血清應無菌分裝成一次的用量并存放于-15至-20℃,在產(chǎn)品質(zhì)量證書標識的效期內(nèi)均可使用。2-8℃溶解后建議盡快使用。
? 血清的有效期是多久?
大部分康寧血清效期是5年,針對每個批次,請通過質(zhì)檢文件確定具體效期日期。
? 血清應如何融解?
從冰箱中取出血清,放于2-8℃融化,融化過程中不時旋轉(zhuǎn)(swirling mix)混勻。充分融解后分裝或平衡到室溫后使用
? 為什么有時血清中出現(xiàn)絮狀沉淀?是否需要去除?如何去除?
多種原因可能導致絮狀沉淀的形成,最常見的原因之一是融化過程中,脂蛋白聚集所致。該現(xiàn)象一般不會影響產(chǎn)品質(zhì)量。可以400g離心5分鐘,取上清,然后過濾。根據(jù)需要選擇合適的濾膜孔徑,一般最常用的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為避免濾膜阻塞,建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾而不是直接過濾血清。
? 為什么存放于冰箱中的血清會出現(xiàn)沉淀?如何避免該現(xiàn)象?
在2-8°C條件下存放,血清中的多種蛋白或脂蛋白會形成肉眼可見的沉淀,如血纖蛋白(fibrin),單體時處于溶解狀態(tài),在凍融過程中會發(fā)生聚集,形成肉眼可見的沉淀。但該現(xiàn)象一般不會影響血清的性能??梢?00g離心5分鐘,取上清,然后過濾。根據(jù)需要選擇合適的濾膜孔徑,一般最常用的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為避免濾膜阻塞,建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾而不是直接過濾血清。為盡量避免出現(xiàn)上述現(xiàn)象,建議血清分裝成一次性用量存于-15°至-20℃冰箱,避免反復凍融和融化后的血清在2-8°C條件下長時間放置。
? 血清是否需要做滅活處理?
這取決于您的應用。
滅活過程中,會導致血清中某些成分被破壞,如氨基酸,維生素,生長因子等。所以只有在您的實驗對血清有特殊要求時,才會考慮對血清進行滅活處理。如您的實驗對血清中的某種組分敏感,需要去除該組分。最常見的情況是需要去除血清中的補體蛋白,因為補體在機體中參與細胞殺傷,巨噬細胞和淋巴細胞活化,肥大細胞和血小板組胺釋放,平滑肌收縮等過程,所以一般在免疫學相關研究中及肌細胞和干細胞的培養(yǎng)過程中需要對血清進行滅活處理。
? 如何進行血清滅活處理?
血清請先按上述“血清應如何融解”中的操作步驟融化和混勻,熱滅活時請將血清置于56℃水浴30分鐘。為盡量減少熱滅活對血清品質(zhì)的影響,一次滅活的血清體積不宜過大。最好準備同樣的容器裝相等體積的水(與血清相同溫度),滅活時將裝有血清和水的容器同時放入56℃水浴, 在裝水的容器中放置溫度計,加熱過程中不時輕輕旋轉(zhuǎn)混勻血清,當溫度計顯示達到56℃左右,開始計時。56 ℃水浴后,建議馬上轉(zhuǎn)移到冰上降溫。
? 為什么需要對血清進行gamma射線輻照?
gamma 射線輻照的目的是滅活血清中的病毒,一般情況下,25-40kGy和30-45kGy是常用的輻射劑量。
? 什么情況下需要無Ca2+/Mg2+離子的PBS?
取決于您的研究應用。除了一些Ca2+/Mg2+會影響實驗結果的實驗以外,一般在胰酶消化前,建議用無Ca2+/Mg2+離子的PBS清洗細胞,因為Ca2+/Mg2+會抑制胰酶活性。若消化后的貼壁細胞需要繼續(xù)培養(yǎng),建議消化后用含Ca2+/Mg 2+的PBS清洗,因為Ca2+/Mg2+有助于細胞的貼壁過程。另外,若需要在緩沖液中長時間保存細胞,也推薦使用含Ca2+/Mg2+的PBS。
? 康寧無Ca2+/Mg2+離子的PBS和DPBS的區(qū)別是什么?
取決于您的研究應用。除了一些Ca2+/Mg2+會影響實驗結果的實驗以外,一般在胰酶消化前,建議用無Ca2+/Mg2+離子的PBS清洗細胞,因為Ca2+/Mg2+會抑制胰酶活性。若消化后的貼壁細胞需要繼續(xù)培養(yǎng),建議消化后用含Ca2+/Mg2+的PBS清洗,因為Ca2+/Mg2+有助于細胞的貼壁過程。另外,若需要在緩沖液中長時間保存細胞,也推薦使用含Ca2+/Mg2+的PBS。
? 康寧是否有注射級別(WFI)的水?
康寧細胞培養(yǎng)用水按照USP和/或EP 中對注射用水(WFI)的無菌要求進行質(zhì)控,但康寧的該類產(chǎn)品為科研用產(chǎn)品,非臨床注射用水。
? 用于消化的胰酶中加EDTA的原因是什么?
鈣離子會抑制胰酶活性,EDTA作為鈣離子螯合劑,可以去除鈣離子,有助于胰酶更好發(fā)揮消化細胞的功能
? 為什么在使用胰酶前要先清洗貼壁細胞?
目前大部分情況下,細胞培養(yǎng)液中都含有一定量血清。血清中含有抑制胰酶活性的成分,如α1-antitrypsin 和α2-macroglobulin。建議使用無鈣鎂離子的緩沖液清洗細胞。
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